基因組DNA快速提取試劑盒（硅膠膜離心柱法）
產品組分
貨號 | N1111 （50次） | N1112 （100次） |
消化緩沖液DS | 15 ml | 30 ml |
裂解液MS | 20 ml | 40 ml |
蛋白酶K（20mg/ml） | 1 ml | 2 ml |
去蛋白液PS | 30 ml | 60 ml |
漂洗液PE | 15 ml | 30 ml |
純化液TE | 5 ml | 10 ml |
DNA純化柱 | 50個 | 100個 |
說明書 | 1份 | 1份 |
● 裂解液MS中含變性劑，請不要直接接觸皮膚。
● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋，
即含75%乙醇。
產品說明
本產品可用于昆蟲、線蟲、動物等樣本的基因組DNA純化。純化原理是利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附體系中的基因組DNA，經蛋白酶K消化、漂洗液清洗除去蛋白質、脂質以及多糖等雜質，用純化液洗脫獲得基因組DNA。一次可從不超過10 mg組織材料中提取到3-35 μg的高純度基因組DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續實驗。
質量控制
純化的基因組DNA質量通過限制性酶切和單拷貝基因的PCR擴增鑒定。
保存條件
蛋白酶K室溫運輸，于-20℃保存，避免反復凍融。
其余試劑置于室溫（15-25℃）干燥條件下保存1年。
如果消化緩沖液DS和MS中有沉淀，可在55℃加熱溶解，待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA的純化效率。
注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
● 漂洗液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入3倍體積的無水乙醇，即15 ml漂洗液PE加入45 ml無水乙醇，30 ml漂洗液PE加入90 ml無水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。
● 消化緩沖液DS和裂解液MS室溫保存可能會有沉淀產生，在55℃加熱溶解，待恢復至室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA純化效率。
● 應盡量使用新鮮的實驗材料，確保提取的基因組DNA不被降解。不能立刻提取基因組DNA 的實驗材料應盡快置于液氮或-80℃冰箱中保存并避免反復凍融。
● 使用液氮研磨組織材料時，應隨時加入液氮，確保提取的基因組DNA不被降解。
● 基因組DNA需長期保存時，建議使用純化液TE。用無菌的離心管分裝后保存于-20℃或-80℃。
● 所有離心步驟均為室溫下進行。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 取少量樣本材料，放入液氮預冷的研缽中。快速用力研磨的同時加入少量液氮，直至樣本材料被研磨成粉末。將研磨好的樣本轉移至1.5 ml離心管中，每管組織材料含量應不超過10 mg。
● 如沒有液氮，可用剪刀剪成小塊，放入研缽或勻漿器中，加入適量TE（pH 8.0），處理成細胞懸液。將不超過10 mg當量的細胞懸液轉移至一個新的1.5 ml的離心管中，12,000 rpm離心1min，棄上清，收集沉淀。
● 每只離心管中的樣本當量不宜超過10 mg。每10 mg樣本材料可獲得10 μg基因組DNA。樣本量過大，將會影響細胞核裂解效率并可能堵塞純化柱，進而降低基因組DNA的得率與純度。
2 加入200 μl消化緩沖液DS，渦旋振蕩至形成完全均一的懸浮液。
● 如需去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml，N9042），振蕩15秒，室溫放置5min。
3 加入20 μl蛋白酶K，混勻，55℃水浴或金屬浴，至組織完全溶解，通常需要1-3小時。對特別難溶解的組織如尾巴、昆蟲可放置過夜。
4 加入220 μl裂解液MS，渦旋振蕩混勻。65℃溫浴10min。溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的水珠，室溫放置5min使溶液冷卻。
● 加入裂解液MS時可能會產生白色沉淀，一般65℃放置時會消失，不會影響后續實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
5 加入220 μl無水乙醇，上下顛倒混勻。此時可能出現絮狀沉淀。簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉移到純化柱中。12,000 rpm離心1min，棄濾液。
● 若溶液體積大于純化柱容積（700 μl），可分兩次離心。
● 此時基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
6 加入500 μl去蛋白液PS，12,000 rpm離心1min，棄濾液。
● 此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質等雜質，以獲得高質量基因組DNA。
7 加入500μl漂洗液PE，12,000 rpm離心1min，棄濾液。
● 漂洗液PE初次使用前用無水乙醇按1: 3稀釋，即含75%乙醇。
8 加入500 μl漂洗液PE，12,000 rpm離心1min，棄濾液。
9 12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續的酶促反應（PCR或酶切）。同時利于基因組DNA充分溶解。
10 將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處，懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。
11 12,000 rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。
● 洗脫液TE可用去離子水代替，但其pH需為8.0-8.5。
● 對洗脫液TE 65℃預熱，會提高基因組DNA的產量。
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